Microdisecția fără deplasarea eșantionului

Tehnologia Leica LMD (Laser Microdissection) utilizează un sistem de ghidare optică prin prisme pentru deflecția precisă a fasciculului laser, permițând microdisecția directă, perpendiculară pe planul probei, fără deplasarea eșantionului.

Această arhitectură elimină necesitatea mișcării mecanice a specimenului, reducând artefactele de poziționare și riscul de contaminare. Modul „Move and Cut” permite tăierea în timp real, cu urmărirea dinamică a traiectoriei de disecție prin control optic sincronizat.

Disecție optică cu recuperare gravitațională a fragmentelor pentru puritate maximă
Sistemele Leica LMD utilizează gravitația ca metodă fundamentală de colectare a materialului disecat, eliminând complet contactul fizic sau intervenția mecanică în procesul de izolare a probei. Acest principiu garantează integritatea morfologică și moleculară a eșantioanelor, esențială pentru analizele ulterioare de înaltă sensibilitate – fie ele genomice, proteomice sau citologice.

Fluxul de lucru în 3 pași simpli și sterili:

1. Selectați regiunea de interes (ROI) direct pe imaginea eșantionului.
2. Fasciculul laser este dirijat optic de sistem, urmând cu precizie conturul definit.
3. Fragmentele decupate (disectate) cad direct prin forța gravitațională într-un recipient de colectare steril (tub, capăt de microcentrifugă, lamelă inversă sau cap de PCR), fiind astfel gata pentru analiza ulterioară – fără contaminare, fără artefacte.

Ajustarea parametrilor laserului în funcție de probă

Sistemul Leica LMD7 permite reglarea fină a parametrilor laserului — putere, deschidere (apertură), viteză de scanare, curent al capului laser și frecvență a impulsurilor — pentru a se adapta tipului de probă analizat.

De exemplu:

• Secțiunile vegetale groase necesită putere crescută,
• Disecția în jurul neuronilor fragili impune putere redusă.
• Secțiunile subțiri pot fi procesate cu viteze mai mari de tăiere decât cele groase.

Consumabile pentru microdisecție laser Leica LMD

A) Proba (Specimen)

Leica Microsystems oferă o gamă variată de lame specializate pentru aplicații de microdisecție laser, în funcție de tipul de analiză moleculară:

• Lame cu membrană (ex. PEN, PET, PPS, etc.): Recomandate pentru aplicații în genomică și transcriptomică, datorită capacității de a păstra integritatea ARN/ADN-ului extrași.
• Lame PET (polietilen tereftalat): Indicate pentru aplicații specifice în proteomică și metabolomică, întrucât PET-ul este aproape lipsit de plastifianți (softeners) ce pot interfera cu analizele sensibile.
• Lame DIRECTOR (fără membrană): Permite microdisecția directă fără strat suport, potrivită pentru aplicații ce necesită contact direct cu suportul de sticlă.

Pentru alegerea corectă a lamei în funcție de aplicația LMD, se recomandă consultarea ghidului de compatibilitate a consumabilelor.

B) Colectare

Sistemele Leica LMD utilizează colectarea gravitațională a disectatelor, eliminând contactul direct și minimizând riscul de contaminare. Disectatele sunt colectate direct în capace de microtuburi standard (ex. 0.2 ml sau 0.5 ml), utilizate frecvent în biologia moleculară.

Dispozitivele de colectare pot fi fie:

• uscate, pentru conservare ulterioară
• preumplute cu buffer de reacție sau medii de cultură, în funcție de aplicația LMD